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维生素C的测定方法

阅读人数:316 发布时间:2019/6/5 11:13:58

         维生素C是一种已糖醛基酸,有抗坏血病的作用,所以被人们称做抗坏血酸,主要为还原型及脱氢型两种,广泛存在于植物组织中,新鲜的水果、蔬菜,特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量较多。它是氧化还原酶之一,本身易被氧化,但在有些条件下又是一种抗氧化剂。

        维生素C(还原型)纯品为白色无臭结晶,熔点190~192℃,溶于水或乙醇中,不溶于油剂。在水溶液中易被氧化,在碱性条件下易分解,在弱酸条件中较稳定,维生素C开始氧化为脱氢型抗坏血酸(有生理作用)。如果进一步水解则生成2,3-二酮古乐糖酸,失去生理作用。
根据它具有的还原性质可以测定维生素C的含量。常用的测定方法有
(1)2,6-二氯靛酚法  (还原型VC)
(2)2,4-二硝基苯肼法  (总VC)
(3)碘酸法
(4)碘量法
(5)荧光分光光度法
        下面小编主要为大家介绍一下前两种方法:
        一、2,6-二氯靛酚滴定法
        1、原理:
        还原型抗坏血酸还原染料2,6-二氯靛酚,该染料在酸性中呈红色,被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2,6-二氯靛酚后,本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时,一定量的样品提取液还原标准2,6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。
        2、试剂
⑴ 1%草酸溶液:称取10g草酸,加水至1000ml;
⑵ 2%草酸溶液:称20g草酸,加水至1000ml;
⑶ 维生素C标准液:准确称20mgVC溶于1%草酸中,并稀释至100ml,吸5ml于50ml容量瓶中,加入1%草酸至刻度,此溶液每毫升含有0.02mgVC;
⑷ 0.02%2,6-二氯靛酚溶液:称取2,6-二氯靛酚50mg,溶于200ml含有52mg碳酸氢钠的热水中,冷却后,稀释至250ml,过滤于棕色瓶中,贮存于冰箱内,应用过程中每星期标定一次。
标定一:吸标液(VC)5ml于三角瓶→加6%KI溶液0.5ml→加1%淀粉3滴→用0.001N KIO3标液滴定到淡兰色。
计算:
抗坏血酸浓度(mg/ml)= (V1 × 0.088)/ V2
V1 - 滴定时消耗0.001N KIO3标液的体积(ml)
V2 -维生素C重量(g)
0.088 -1ml0.001N KIO3标液≈维生素C的量(mg/ml)
标定二:吸5ml已知浓度V C标液 → 加5ml1%草酸 → 用染料2,6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色,在15秒不褪色为终点
计算:每毫升2,6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度(T)
T= (C × V1)/  V2
C - 维生素C的浓度(mg/ml)
V1 -维生素C的体积(ml)
V2 -消耗2,6-二氯靛酚的体积(ml)
⑸ 0.001N KIO3标液:吸0.1N KIO3溶液5ml→于500ml容量瓶内→加水至刻度,每毫升相当于VC0.008mg;
⑹ 0.5%淀粉溶液;
⑺ 6%KI溶液;
        3、操作方法
⑴ 提取:称样50g→加2%草酸100ml→到入捣碎机中→处理→过滤→颜色若深可加白陶土
⑵ 滴定:吸5ml样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色
计算:
VC(mg/100g)=(V × T)/ W   × 100
V -消耗染料体积(ml)
T -1ml染料所能氧化维生素C的毫克数
W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数
        4、注意事项
⑴ 所有试剂的配制建议都用重蒸馏水;
⑵ 滴定时,可同时吸二个样品。一个滴定,另一个作为观察颜色变化的参考;
⑶ 样品进入实验室后,应浸泡在已知量的2%草酸液中,以防氧化,损失维生素C;
⑷ 贮存过久的罐头食品,可能含有大量的低铁离子(Fe2+),要用8%的醋酸代替2%草酸。这时如用草酸,低铁离子可以还原2,6-二氯靛酚,使测定数字增高,使用醋酸可以避免这种情况的发生;
⑸ 整个操作过程中要迅速,避免还原型抗坏血酸被氧化;
⑹ 在处理各种样品时,如遇有泡沫产生,可加入数滴辛醇消除;
⑺ 测定样液时,需做空白对照,样液滴定体积扣除空白体积。
        二、2,4-二硝基苯肼法
        可测总抗坏血酸,总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,然后与2,4-二硝基苯肼作用,生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比,将红色脎溶于硫酸后进行比色,由标准曲线计算样品中总VC。
1、原理:
         用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,在继续氧化为二酮古乐糖酸。
        二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎,其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正比,可以比色定量。
2、步骤
⑴ 样品处理与分析
          称一定样 → 加等量2%草酸 → 于高速捣碎机捣碎 → 取匀浆20g → 用1%草酸定容100ml → 过滤 → 取滤液10ml → 加1%草酸10ml → 加少量活性炭 → 摇1分钟 → 静置过滤 → 各取滤液2ml于样品管和样品空白管 → 各管加入1滴硫脲溶液 → 于样品管中加入2,4-二硝基苯肼0.5ml → 分别于两个管加盖 → 于37℃保温箱3小时 → 取出后样品管放入冰水中 → 样品空白管取出后冷至室温 → 在样品空白管加入2,4-二硝基苯肼 → 0.5ml → 样品管和空白管都于冰浴中 → 滴加85%H2SO42ml于各管中 → 边滴边摇 → 防止温度升高炭化后呈黑色 → 冰浴中30分钟后取出 → 室温下放置30分钟后,在540nm测消光值,从标准曲线上查出相应的含量
⑵ 标准曲线的绘制
取5个50ml容量瓶编号  1     2     3     4     5
加VC标液0.2mg/ml     10    20    30    40    50ml
取5个比色管取相应     2     2     2     2     2
加硫脲溶液(滴)       1     1     1     1     1
2,4-二硝基苯肼(ml)0.5   0.5    0.5   0.5    0.5     
于37℃电热恒温培养箱3~4小时,取出于冰浴中,然后滴加85%硫酸2.5ml→取出放30分钟→在540nm下测各消光值绘标准曲线,同时做空白。
计算:每百克食品中抗坏血酸的毫克数=C/W *100

原创作者:上海喆图科学仪器有限公司

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